ஆர்என்ஏ கண்டறிதலுக்கான ஆர்டி-பிசிஆர் எதிர்வினையின் உணர்திறனை எவ்வாறு மேம்படுத்துவது

மரபணு ஆய்வுகளை நடத்தும் செயல்பாட்டில், நாம் அடிக்கடி போதுமான RNA மாதிரிகளை சந்திக்கிறோம், எடுத்துக்காட்டாக, சிறிய உடற்கூறியல் வாய்வழி கட்டிகள், ஒற்றை செல் மாதிரிகள் மற்றும் மனித உயிரணுக்களில் மிகக் குறைந்த அளவில் படியெடுக்கப்பட்ட குறிப்பிட்ட மரபணு மாற்றங்களின் மாதிரிகள் ஆகியவற்றைப் படிப்பதற்காக.நிச்சயமாக, கோவிட்-19 சோதனைக்கு, ஸ்வாப்கள் சரியான இடத்தில் இல்லாமலோ அல்லது மாதிரியின் போது போதுமான நேரம் இல்லாமலோ இருந்தால், மாதிரி அளவு மிகவும் குறைவாக இருக்கும், அதனால்தான் சுகாதார மற்றும் குடும்பக் கட்டுப்பாடு ஆணையம் இரண்டு நாட்களுக்கு முன்பு வெளிவந்தது. சோதனையில் தேர்ச்சி பெற்றார், மேலும் நியூக்ளிக் அமில மாதிரி ஆறு மாதிரிகளை எடுக்கவில்லை என்றால், நீங்கள் அதைப் புகாரளிக்கலாம்.

வினைப்பொருளின் உணர்திறன் முக்கியமானது, ஏனெனில் நமக்கு இந்தப் பிரச்சனை அல்லது அந்தச் சிக்கல் உள்ளது, எனவே RT-PCR இன் உணர்திறனை மேம்படுத்த நாம் என்ன செய்யலாம்?

சாத்தியமான தீர்வுகளைப் பற்றி விவாதிப்பதற்கு முன், நாம் குறிப்பிட்ட சூழ்நிலையில் இரண்டு பெரிய சிக்கல்களைக் குறிப்பிடுவோம்.

முதலாவதாக, நமது மாதிரியில் ஒரு சில செல் மக்கள் மட்டுமே இருக்கும்போது ஆர்என்ஏ இழப்பைப் பற்றி கவலைப்படுகிறோம்.நெடுவரிசை முறை அல்லது நியூக்ளிக் அமில மழைவீழ்ச்சி முறை போன்ற பாரம்பரிய பிரித்தல் மற்றும் சுத்தம் செய்யும் முறைகளைப் பயன்படுத்தினால், சில மாதிரிகள் இழக்கப்படுவதற்கான அதிக வாய்ப்பு உள்ளது.டிஆர்என்ஏ போன்ற கேரியர் மூலக்கூறைச் சேர்ப்பது ஒரு தீர்வாகும், ஆனால் அப்போதும் கூட, எங்களின் மீட்புப் பரிசோதனை சரிதான் என்பதற்கு எந்த உத்தரவாதமும் இல்லை.

எனவே ஒரு சிறந்த வழி என்ன?வளர்ப்பு செல்கள் அல்லது நுண்ணிய உடற்கூறியல் மாதிரிகளுக்கு ஒரு நல்ல வழி நேரடி சிதைவைப் பயன்படுத்துவதாகும்.

5 நிமிடங்களுக்கு செல்களைப் பிரித்து, ஆர்.என்.ஏ.வை கரைசலில் விடுவித்து, பின்னர் 2 நிமிடங்களுக்கு எதிர்வினையை நிறுத்தி, பின் லைசேட்டை நேரடியாக ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் ரியாக்ஷனில் சேர்த்து, ஆர்.என்.ஏ.வை இழக்காமல், இறுதியாக அதன் விளைவாக வரும் சி.டி.என்.ஏ. நிகழ் நேர எதிர்வினைக்குள்.

ஆனால், ஒரு வரையறுக்கப்பட்ட தொடக்கப் புள்ளி அல்லது சிறிய அளவிலான இலக்கு மரபணு வெளிப்பாடு காரணமாக, நாம் அனைத்து RNA ஐயும் மறுசுழற்சி செய்யலாம் மற்றும் நல்ல நிகழ்நேர சமிக்ஞையைப் பெற போதுமான டெம்ப்ளேட்களை வழங்கவில்லை என்றால் என்ன செய்வது?

இந்த வழக்கில், முன்-பெருக்கம் படி மிகவும் பயனுள்ளதாக இருக்கும்.

பின்வருபவை தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனுக்குப் பிறகு உணர்திறனை அதிகரிப்பதற்கான ஒரு திட்டமாகும்.தொடங்குவதற்கு முன், முன்-பெருக்கத்திற்காக இந்த இலக்குகளுக்கான குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்களை வடிவமைக்க, எந்த இலக்குகளில் நாங்கள் ஆர்வமாக உள்ளோம் என்பதை கீழ்நிலையில் கேட்க வேண்டும்.

100 ஜோடி ப்ரைமர்கள் மற்றும் 10 முதல் 14 மடங்கு எதிர்வினை சுழற்சியுடன் கலப்பு ப்ரைமரை உருவாக்குவதன் மூலம் இதை அடைய முடியும்.எனவே, பெறப்பட்ட சிடிஎன்ஏவை முன்கூட்டியே பெருக்க இந்தத் தேவைக்காக பிரத்யேகமாக வடிவமைக்கப்பட்ட ஒரு மாஸ்டர் மிக்ஸ் தேவைப்படுகிறது.

10 மற்றும் 14 க்கு இடையில் சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கையை அமைப்பதற்கான காரணம், இந்த வரையறுக்கப்பட்ட எண்ணிக்கையிலான சுழற்சிகள் பல்வேறு இலக்குகளுக்கு இடையில் சீரற்ற தன்மையை உறுதி செய்கிறது, இது அளவு மூலக்கூறு தகவல் தேவைப்படும் ஆராய்ச்சியாளர்களுக்கு முக்கியமானது.

முன்-பெருக்கத்திற்குப் பிறகு, பெரிய அளவிலான சிடிஎன்ஏவைப் பெறலாம், இதனால் பின்-இறுதியில் கண்டறிதல் உணர்திறன் பெரிதும் மேம்படுத்தப்பட்டுள்ளது, மேலும் மாதிரியை நீர்த்துப்போகச் செய்யலாம் மற்றும் சாத்தியமான சீரற்ற பிழைகளை அகற்ற பல நிகழ்நேர பிசிஆர் எதிர்வினைகளைச் செய்யலாம்.